Produkter

Nuklear akkumulering af en mutant form af det nukleare protein Lamin-A, kaldet Progerin (PG) eller Lamin AΔ50, forekommer i Hutchinson-Gilford Progeria Syndrome (HGPS) eller Progeria, en accelereret aldringssygdom.Et af hovedsymptomerne på denne genetiske lidelse er tab af subkutant fedt på grund af en dramatisk lipodystrofi. Vi inducerede stabilt ekspressionen af ​​humant PG og GFP -Green Fluorescent Protein- som kontrol i 3T3L1-celler ved hjælp af et lentiviralt system til at studere effekt af PG-ekspression i differentieringskapaciteten af ​​denne cellelinje, en af ​​de mest anvendte adipogene modeller.Kvantitativ proteomik (iTRAQ) blev udført for at studere effekten af ​​PG-akkumuleringen.Flere af de modulerede proteiner blev valideret ved immunblotting og real-time PCR.Mitokondriel funktion blev analyseret ved måling af a) den mitokondrielle basale aktivitet, b) superoxidanionproduktionen og c) den individuelle effektivitet af de forskellige komplekser af respirationskæden. Vi fandt ud af, at overekspression af PG ved lentiviral genlevering fører til en fald i proliferationshastigheden og til defekter i adipogen kapacitet sammenlignet med kontrollen.Kvantitativ proteomisk analyse viste 181 proteiner signifikant (p<0,05) modulerede i PG-udtrykkende præadipocytter.Mitokondriel funktion er svækket i PG-udtrykkende celler.Specifikt har vi detekteret en stigning i aktiviteten af ​​kompleks I og en overproduktion af Superoxidanion.Inkubation med Reactive Oxygen Species (ROS) scavenger-midler driver til et fald i autofagisk proteolyse som afsløret af LC3-II/LC3-I ratio.PG-ekspression i 3T3L1-celler fremmer ændringer i adskillige biologiske processer, herunder cytoskelettets struktur, lipidmetabolisme, calcium regulering, translation, proteinfoldning og energigenerering af mitokondrierne.Vores data styrker bidraget fra ROS-akkumulering til den for tidlige ældningsfænotype og etablerer en sammenhæng mellem mitokondriel dysfunktion og tab af proteostase i HGPS.