Produkter

I lighed med andre positivstrengede RNA-vira replikeres tombusvirus af det membranbundne virale replikasekompleks (VRC).VRC består af den p92-viruskodede RNA-afhængige RNA-polymerase (RdRp), den virale p33 RNA-chaperon og flere co-opterede værtsproteiner.For at blive en funktionel RdRp efter dets translation, bør p92-replikationsproteinet inkorporeres i VRC, efterfulgt af dets aktivering.Vi har tidligere vist i et cellefrit gærekstrakt-baseret assay, at aktiveringen af ​​Tomato bushy stunt virus (TBSV) RdRp kræver en opløselig værtsfaktor(er).I denne artikel identificerer vi det cellulære varmechokprotein 70 (Hsp70) som den co-opterede værtsfaktor, der kræves til aktivering af en N-terminalt trunkeret rekombinant TBSV RdRp.Derudover hæmmer småmolekyle-baseret blokering af Hsp70-funktion RNA-syntese af tombusvirus RdRp in vitro.Desuden viser vi, at neutrale phospholipider, nemlig phosphatidylethanolamin (PE) og phosphatidylcholin (PC), øger RdRp-aktivering in vitro.I modsætning hertil viser phosphatidylglycerol (PG) en stærk og dominerende hæmmende effekt på in vitro RdRp-aktivering.Vi viser også, at PE og PC stimulerer RdRp-viral plus-streng RNA [(+)RNA] interaktion, mens PG hæmmer bindingen af ​​det virale RNA til RdRp.Baseret på de stimulerende kontra inhiberende roller af forskellige phospholipider i tombusvirus RdRp-aktivering foreslår vi, at lipidsammensætningen af ​​målrettede subcellulære membraner kan bruges af tombusvirus til at regulere ny VRC-samling under infektionsforløbet. Den viruskodede RNA-afhængige RNA-polymerase (RdRp), som er ansvarlig for at syntetisere det virale RNA-afkom i inficerede celler fra flere positivstrengede RNA-vira, er oprindeligt inaktivt.Denne strategi vil sandsynligvis undgå viral RNA-syntese i cytosolen, der hurtigt ville føre til induktion af RNA-udløste cellulære antivirale responser.Under samlingen af ​​det membranbundne replikasekompleks bliver det virale RdRp aktiveret gennem en ufuldstændigt forstået proces, der gør RdRp i stand til RNA-syntese.Ved at bruge TBSV RdRp viser vi, at den co-opterede cellulære Hsp70 chaperon og neutrale phospholipider letter RdRp-aktivering in vitro.I modsætning hertil har phosphatidylglycerol (PG) en dominerende hæmmende virkning på in vitro RdRp-aktivering og RdRp-viral RNA-interaktion, hvilket tyder på, at det membranøse mikrodomæne, der omgiver RdRp, i høj grad påvirker dets evne til RNA-syntese.Aktiveringen af ​​det virale RdRp afhænger således sandsynligvis af flere værtskomponenter i inficerede celler.