Produkter

En af de faktorer, der forhindrer klinisk anvendelse af regenerativ medicin til degenerative brusksygdomme, er en egnet kilde til celler.Chondrocytter, den eneste celletype brusk, dyrket in vitro under dyrkningsbetingelser for at udvide celleantallet mister deres fænotype sammen med evnen til at generere hyalint bruskvæv.I denne undersøgelse fastslår vi, at et serum- og vækstfaktor-frit tredimensionelt (3D) dyrkningssystem genopretter de passerede chondrocytters evne til at danne bruskvæv in vitro, en proces, der involverer sox9. Bovine artikulære chondrocytter blev passeret to gange til tillade celleantaludvidelse (P2) og dyrkes ved høj densitet på 3D-kollagen-type-II-coatede membraner i medier med højt glukoseindhold suppleret med insulin og dexamethason (SF3D).Cellerne blev karakteriseret efter monolag ekspansion og efter 3D kultur ved flowcytometri, genekspression og histologi.De tidlige ændringer i signaltransduktionsveje under redifferentiering blev karakteriseret. P2-cellerne viste en progenitorlignende antigenprofil på 99 % CD44(+) og 40 % CD105(+) og en genekspressionsprofil, der tyder på interzone-celler.P2 i SF3D udtrykte chondrogene gener og akkumuleret ekstracellulær matrix.Nedregulering af insulinreceptor (IR) med HNMPA-(AM3) eller PI-3/AKT-kinasevejen (aktiveret ved insulinbehandling) med Wortmannin hæmmet kollagensyntese.HNMPA-(AM3) reducerede ekspression af Col2, Col11 og IR gener såvel som Sox6 og -9.Co-immunpræcipitations- og kromatin-immunfældningsanalyser af HNMPA-(AM3)-behandlede celler viste binding af coaktivatorerne Sox6 og Med12 med Sox9, men reduceret Sox9-Col2a1-binding. Vi beskriver en ny dyrkningsmetode, der muliggør en stigning i antallet af chondrocytter og fremmer hyalinlignende bruskvævsdannelse til dels ved insulin-medieret Sox9-Col2a1-binding.Egnetheden af ​​det væv, der genereres via denne fremgangsmåde, til brug i ledreparation skal undersøges in vivo.