Produkter

Monogalactopyranosider af fluorescein og fluoresceinmethylester: syntese, enzymatisk hydrolyse ved biotnyleret β-galactosidase og bestemmelse af translationel diffusionskoefficient

Fluoresceinmonoglycosider (d-galactopyranosid (FMG) og d-glucopyranosid) og deres methylester (MFMG) er blevet fremstillet ud fra acetobromoglucose/galactose og fluoresceinmethylester i gode udbytter.Enzymatisk hydrolyseforsøg (ved anvendelse af biotinyleret β-galactosidase) af galactoderivaterne er blevet udført, og kinetiske parametre blev beregnet.En 15-20 gange forøgelse af fluorescensintensiteten er blevet observeret under hydrolysen.En lineær stigning i fluorescens er blevet bemærket på kort tid og lav koncentration af substrat, hvilket gør disse forbindelser nyttige og følsomme prober for galactosidaser.Størrelsen af ​​Michaelis-Menten konstant (Km) værdi for MFMG er højere end FMG, hvilket tyder på en mulig konformationel ændring af det fluorogene substrat.Km-værdien for biotinyleret β-Gal med FMG er lavere end for det native enzym.Denne observation indikerer højere substrataffinitet af det biotinylerede enzym i sammenligning med det native enzym.Translationelle diffusionskoefficienter er blevet målt for både fluorogene substrater og begge produkter ved at anvende fluorescenskorrelationsspektroskopi.Translationelle diffusionskoefficienter for fluorogene substrater og de enzymatiske hydrolyseprodukter er blevet målt til at være ens, i området 3,5-4,5 × 10-10 m2 s−1.En forøgelse eller retardering af den enzymatiske kinetik på grund af forskel i translationel mobilitet af substrat og produkt er således ikke så tydelig.