Produkter

Proteinfosforylering regulerer forskellige cellulære funktioner og spiller en nøglerolle i den tidlige udvikling af planter.For at supplere og udvide tidligere undersøgelser af proteinphosphorylering i Arabidopsis-kimplanter brugte vi en alternativ tilgang, der kombinerer proteinekstraktion under ikke-denaturerende betingelser med immobiliseret metalion-affinitetskromatografi (IMAC) berigelse af intakte phosphoproteiner i Rubisco-depleterede ekstrakter, efterfulgt af identifikation ved anvendelse af todimensionel gelelektroforese (2-DE) og væskekromatografi-tandem massespektrometri (LC-MS/MS).In-gel trypsinfordøjelse og analyse af udvalgte gelpletter identificerede 144 phosphorylerede peptider og rester, hvoraf kun 18 phosphopeptider og 8 phosphositter blev fundet i PhosPhAt 4.0 og P3DB Arabidopsis thaliana phosphoryleringssteddatabaserne.Mere end halvdelen af ​​de 82 identificerede phosphoproteiner var involveret i kulhydratmetabolisme, fotosyntese/respiration eller oxidativ stress respons mekanik sms.Berigelse af intakte phosphoproteiner før 2-DE og LC-MS/MS ser ud til at forbedre detektion af phosphorylerede threonin- og tyrosinrester sammenlignet med metoder, der anvender berigelse på peptidniveau, hvilket tyder på, at de to tilgange er noget komplementære med hensyn til dækning af fosforyleringssted.Sammenligning af resultater for unge frøplanter med dem, der tidligere er opnået for modne Arabidopsis-blade, identificerede fem proteiner, der er differentielt phosphorylerede i disse væv, hvilket demonstrerer potentialet af denne teknik til at undersøge dynamikken i proteinphosphorylering under planteudvikling.