Produkter

X-gal (også forkortet BCIG for 5-brom-4-chlor-3-indolyl-β-D-galactopyranosid) er en organisk forbindelse bestående af galactose bundet til en substitueret indol.Forbindelsen blev syntetiseret af Jerome Horwitz og samarbejdspartnere i 1964. Det formelle kemiske navn er ofte forkortet til mindre nøjagtige, men også mindre besværlige sætninger såsom bromchlorindoxylgalactosid.X'et fra indoxyl kan være kilden til X'et i X-gal kontraktionen.X-gal bruges ofte i molekylærbiologi til at teste for tilstedeværelsen af ​​et enzym, β-galactosidase, i stedet for dets sædvanlige mål, et β-galactosid.Det bruges også til at påvise aktiviteten af ​​dette enzym i histokemi og bakteriologi.X-gal er en af ​​mange indoxylglykosider og estere, der giver uopløselige blå forbindelser svarende til indigo-farvestof som et resultat af enzymkatalyseret hydrolyse.

X-gal er en analog af lactose og kan derfor hydrolyseres af β-galactosidase-enzymet, som spalter β-glycosidbindingen i D-lactose.X-gal giver, når den spaltes af β-galactosidase, galactose og 5-brom-4-chlor-3-hydroxyindol - 1. Sidstnævnte dimeriserer derefter spontant og oxideres til 5,5'-dibrom-4,4'-dichlor -indigo - 2, et intenst blåt produkt, som er uopløseligt.X-gal i sig selv er farveløs, så tilstedeværelsen af ​​blåfarvet produkt kan derfor bruges som en test for tilstedeværelsen af ​​aktiv β-galactosidase.Dette muliggør også, at bakteriel β-galactosidase (såkaldt lacZ) kan anvendes som reporter i forskellige applikationer.

I to-hybridanalyse kan β-galactosidase anvendes som en reporter til at identificere proteiner, der interagerer med hinanden.I denne metode kan genombiblioteker screenes for proteininteraktion ved hjælp af gær eller bakteriesystem.Hvor der er en vellykket interaktion mellem proteiner, der screenes, vil det resultere i binding af et aktiveringsdomæne til en promotor.Hvis promotoren er koblet til et lacZ-gen, vil produktionen af ​​β-galactosidase, som resulterer i dannelsen af ​​blåpigmenterede kolonier i nærvær af X-gal, derfor indikere en vellykket interaktion mellem proteiner.Denne teknik kan være begrænset til screening af biblioteker med en størrelse på mindre end omkring 106. Den vellykkede spaltning af X-gal skaber også en mærkbart dårlig lugt på grund af fordampningen af ​​indol.

Da X-gal selv er farveløs, kan tilstedeværelsen af ​​blåfarvet produkt bruges som en test for tilstedeværelsen af ​​en aktiv β-galactosidase.

Denne lette identifikation af et aktivt enzym gør det muligt for genet for βgalactosidase (lacZ-genet) at blive brugt som et reportergen i forskellige applikationer.