Produkter

1. Metabolitprofileringsmetoder er vigtige værktøjer til måling af metabolitpuljer i biologiske systemer.Mens de fleste metabolitprofileringsmetoder rapporterer relative intensiteter eller afhænger af nogle få interne standarder, der repræsenterer alle metabolitter, er det ultimative krav til en kvantitativ beskrivelse af metabolitpuljen i biologiske celler og væsker absolut koncentrationsbestemmelse.Vi rapporterer her en high-throughput og følsom gaskromatografi/tandem massespektrometri (GC/MS/MS) målrettet metabolitprofileringsmetode, der muliggør absolut kvantificering af alle påviste metabolitter.Metoden er baseret på methylchlorformiat-derivatisering og kvantificering ved at spike prøver med metabolitstandarder separat derivatiseret med deutererede derivatiseringsreagenser.Den traditionelle elektronpåvirkningsionisering erstattes med positiv kemisk ionisering, da sidstnævnte i langt højere grad bevarer den molekylære ion og andre højmolekylære fragmenter.Dette gjorde det nemmere at vælge unikke MS/MS-overgange blandt de mange coeluerende metabolitter.I øjeblikket omfatter den nye GC/MS/MS-metode 67 almindelige primære metabolitter, hvoraf de fleste tilhører grupperne af aminosyrer og ikke-aminoorganiske syrer.Vi viser metodens anvendelighed på urin- og serumprøver.Metoden er en væsentlig forbedring af den nuværende metodologi til kvantitativ GC/MS-metabolitprofilering af aminosyrer og ikke-aminoorganiske syrer.

2.24S-Hydroxycholesterol (24OHC) og 27-hydroxycholesterol (27OHC) er to strukturelt lignende oxysteroler af forskellig oprindelse - førstnævnte dannes næsten udelukkende i hjernen, og sidstnævnte dannes i mindre grad i hjernen end i de fleste andre organer.HYPOTESE SKAL TESTES: Neuronal skade og/eller demyelinisering forårsager øget flux af 24OHC fra hjernen ind i cerebrospinalvæsken (CSF), hvorimod en defekt blod-hjerne-barriere forårsager øget flux af 27OHC fra kredsløbet ind i CSF. Isotopfortyndingsmasse spektrometri blev brugt til at analysere de to oxysteroler i CSF og plasma fra mere end 250 patienter med forskellige neurologiske og geriatriske sygdomme. CSF-niveauerne af de to oxysteroler var meget mere påvirket af de forskellige sygdomme end plasmaniveauerne.Patienter med aktive demyeliniserende sygdomme havde øgede niveauer af 24OHC i CSF med et relativt højt 24OHC/27OHC-forhold.Patienter med meningitis havde generelt høje niveauer af begge steroider med et lavt 24OHC/27OHC-forhold.Patienter med Alzheimers sygdom havde lidt forhøjede niveauer af 24OHC i CSF med mindre stigning i 27OHC.Patienter med multipel sklerose havde en tendens til at have højere niveauer af 24OHC i aktive perioder med et højt 24OHC/27OHC-forhold. Målinger af de to oxysteroler i CSF og plasma kan bidrage væsentligt til eksisterende biokemiske metoder til evaluering af neurologiske sygdomme.