Produkter

Membrantopologien af ​​colicin E1-kanaldomænet blev undersøgt ved fluorescensresonansenergioverførsel (FRET).FRET involverede en genetisk kodet fluorescerende aminosyre (cumarin) som donor og en selektivt mærket cysteinrest bundet med DABMI (4-(dimethylamino)phenylazophenyl-4'-maleimid) som FRET-acceptor.Den fluorescerende coumarinrest blev inkorporeret i proteinet via et ortogonalt tRNA/aminoacyl-tRNA-syntetasepar, der tillod selektiv inkorporering i et hvilket som helst sted i colicinkanaldomænet.Hver variant rummede en stop (TAG) mutation for coumarin inkorporering og en cystein (TGT) mutation for DABMI vedhæftning.Seks interhelikale afstande inden for spiral 1-6 blev bestemt ved anvendelse af FRET-analyse for både de opløselige og membranbundne tilstande.FRET-dataene viste store ændringer i de interheliske afstande mellem helixer 3-6 efter membranassociering, hvilket gav ny indsigt i den membranbundne struktur af kanaldomænet.Generelt faldt den interheliske effektivitet af coumarin-DABMI FRET ved membranbinding og byggede på paraplymodellen for colicinkanalen.En foreløbig model for den lukkede tilstand af kanaldomænet blev udviklet baseret på aktuelle og tidligere offentliggjorte FRET-data.Modellen foreslår cirkulært arrangement af helixer 1-7 i retning med uret fra den ekstracellulære side og membrangrænsefladesammenslutning af helixer 1, 6, 7 og 10 omkring den centrale transmembrane hårnål dannet af helixerne 8 og 9.