Produkter

Oxidativ beskadigelse af DNA-baser resulterer almindeligvis i dannelsen af ​​oxiderede puriner, især 7,8-dihydro-8-oxoguanin (8-oxoG) og 7,8-dihydro-8-oxoadenin (8-oxoA), hvor førstnævnte er en brønd. kendt mutagen læsion.Da 8-oxoG let udsættes for yderligere oxidation sammenlignet med normale baser, blev indsættelsen af ​​en base under DNA-syntese modsat en oxideret form af 8-oxoG undersøgt in vitro.En syntetisk skabelon indeholdende en enkelt 8-oxoG læsion blev først behandlet med forskellige en-elektron oxidanter eller under singlet oxygen betingelser og derefter underkastet primer forlængelse katalyseret af Klenow fragment exo- (Kf exo-), kalve thymus DNA polymerase alfa (pol alfa) ) eller human DNA-polymerase beta (pol beta).I overensstemmelse med tidligere rapporter indsættes dAMP og dCMP selektivt modsat 8-oxoG med alle tre DNA-polymeraser.Interessant nok viste det sig, at oxidation af 8-oxoG inducerede dAMP- og dGMP-insertion modsat læsionen af ​​Kf exo- med forbigående inhibering af primerforlængelse, der forekommer på stedet for den modificerede base.Desuden udgør læsionen en blokering under DNA-syntese af pol alfa og pol beta.Eksperimenter med et 8-oxoA-modificeret skabelonoligonukleotid viser, at både 8-oxoA og en oxideret form af 8-oxoA direkte indsættelse af dTMP med Kf exo-.Massespektrometrisk analyse af 8-oxoG-holdige oligonukleotider før og efter oxidation med IrCl62-er i overensstemmelse med oxidation af primært 8-oxoG-stedet, hvilket resulterer i dannelse af en guanidinohydantoin-del som hovedproduktet.Der blev ikke opnået evidens for dannelse af abasiske steder.Disse resultater viser, at en oxideret form af 8-oxoG, muligvis guanidinohydantoin, kan styre fejllæsning og fejlindsættelse af dNTP'er under DNA-syntese.Hvis en sådan proces fandt sted in vivo, ville den repræsentere en punktmutagen læsion, der fører til G-->T- og G-->C-transversioner.Imidlertid viser den tilsvarende oxiderede form af 8-oxoA primært korrekt indsættelse af T under DNA-syntese med Kf exo-.