Produkter

Mekanistisk indsigt i en Ca2+-afhængig familie af alfa-mannosidaser i en menneskelig tarmsymbiont.

Tyktarmsbakterier, eksemplificeret ved Bacteroides thetaiotaomicron, spiller en nøglerolle i at opretholde menneskers sundhed ved at udnytte store familier af glycosidhydrolaser (GH'er) til at udnytte diætpolysaccharider og værtsglykaner som næringsstoffer.En sådan GH-familieudvidelse er eksemplificeret ved de 23 familie-GH92-glycosidaser, der kodes af B. thetaiotaomicron-genomet.Her viser vi, at disse er alfa-mannosidaser, der virker via en enkelt forskydningsmekanisme for at udnytte værts-N-glycaner.Den tredimensionelle struktur af to GH92 mannosidaser definerer en familie af to-domæneproteiner, hvori det katalytiske center er placeret ved domænegrænsefladen, hvilket giver syre (glutamat) og base (aspartat) assistance til hydrolyse i en Ca(2+)- afhængig måde.De tredimensionelle strukturer af GH92'erne i kompleks med inhibitorer giver indsigt i specificiteten, mekanismen og den konformationelle rute for katalyse.Ca(2+) spiller en vigtig katalytisk rolle i at hjælpe med at forvrænge mannosiden væk fra dens grundtilstand (4)C(1) stolkonformation mod overgangstilstanden. (Bibliografi: Nat.Chem.Biol.6, 125-32, (2010）

Frontal affinitetskromatografi af ovalbumin glycoasparaginer på en concanavalin A-sepharose søjle.En kvantitativ undersøgelse af lectinets bindingsspecificitet.

Interaktionerne af Sepharose 4B-immobiliseret concanavalin A (ConA) med 10 glycoasparginer afledt af ovalbumin blev undersøgt kvantitativt ved frontal affinitetschromatografi.I denne metode påføres en kulhydratopløsning kontinuerligt på en ConA-Sepharose-søjle, og retarderingen af ​​elueringsfronten måles som en parameter for styrken af ​​interaktionen.Dissociationskonstanten (Kd) for hvert saccharid med ConA kan bestemmes.En analyse af bindingen af ​​p-nitrophenyl-alpha,D-mannosid har vist, at bindingsegenskaberne af ConA ikke ændres væsentligt efter immobilisering på Sepharose 4B.Hver af ovalbumin-glycoasparaginerne blev mærket med tritium ved den reduktive methyleringsmetode til analyse.En sammenligning af de opnåede Kd-værdier viste, at bindingen af ​​ConA varierer betydeligt med meget små strukturelle forskelle i glycosylkæden.Resultaterne tyder på, at ConA genkender en specifik glycosylkædestruktur, Man alpha 1-6(Man alpha 1-3)Man, hvori mindst én hydroxylgruppe i C-3-stillingen af ​​C-6-bundet mannose bør være fri.