Produkter

Serin/threoninproteinphosphataser er blevet beskrevet i mange patogene bakterier som essentielle enzymer involveret i phosphoryleringsafhængige signaltransduktionsveje og ofte forbundet med disse organismers virulens.En inspektion af Mycoplasma synoviae-genomet afslørede tilstedeværelsen af ​​et gen (prpC), der koder for en formodet proteinphosphatase fra proteinphosphatase 2C (PP2C) underfamilien.Her rapporterer vi en komplet biokemisk karakterisering af M. synoviae phosphatase (PrpC) og den særlige rolle af metalioner i struktur-funktion forholdet af dette enzym.PrpC-aminosyresekvensanalyse afslørede, at alle resterne involveret i det dinukleære metalcenter og de formodede tredje metalion-koordinerende rester, konserveret i PP2C-phosphataser, er til stede i PrpC.PrpC er et monomert protein i stand til at dephosphorylere phospho-substrater med Mn(2+)-ioners afhængighed.Termisk stabilitetsanalyse viste enzymstabiliteten ved milde temperaturer og påvirkningen af ​​Mn(2+)-ioner i denne egenskab.Massespektrometrianalyse antydede, at tre metalioner binder til PrpC, hvoraf to med en tilsyneladende højaffinitetskonstant.Mutationsanalyse af de formodede tredje metal-koordinerende rester, Asp122 og Arg164, afslørede, at disse varianter udviste en svagere binding af manganioner, og at begge mutationer påvirkede PrpC-phosphataseaktivitet.Ifølge disse resultater er PrpC et metalafhængigt proteinphosphatase-medlem med en forbedret stabilitet i holo-formen og med Asp122, muligvis impliceret i det tredje metalbindingssted, essentielt for katalytisk aktivitet.